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錳過氧化物酶(MnP)測試盒

簡要描述:錳過氧化物酶(MnP)測試盒 錳過氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-08
  • 訪  問  量:643

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
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錳過氧化物酶(MnP)測試盒

微量法100T/96S

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔(dān)子菌中,屬于木質(zhì)素降解酶系,能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環(huán)芳烴等。

測定原理

錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下,將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制                 

試劑一:液體110mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。

試劑三:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體2mL×1支,4℃保存。

酶液提取

  1. 組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。

  2. 細胞:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。

  3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測。                         

測定操作

  1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至465nm,蒸餾水調(diào)零。

  2. 測定前將試劑一、二、三、四在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上。

  3. 樣本測定表

試劑名稱(µL)

測定管

樣本

20

試劑一

100

試劑二

20

試劑三

40

試劑四

20

在微量石英比色皿或96孔板中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄465nm下30s時的吸光值A(chǔ)1和2min30s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1。

注意:若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測定時加入20µL樣本和180µL混合液測定。

酶活計算公式

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義每克樣品每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/g 鮮重)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109] ÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 413×ΔA÷W

3.按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109] ÷(V樣×細胞數(shù)量÷V樣總)÷T

= 413×ΔA÷細胞數(shù)量

4.按照液體體積計算

酶活性定義每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T= 413×ΔA

ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,2×10-4 L;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,2min

  1. 96孔板測定的計算公式如下

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義每克樣品每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/g 鮮重)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109] ÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 826×ΔA÷W

3.按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109] ÷(V樣×細胞數(shù)量÷V樣總)÷T

= 826×ΔA÷細胞數(shù)量

4.按照液體體積計算

酶活性定義每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T= 826×ΔA

ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,2×10-4 L;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,2min

上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

錳過氧化物酶(MnP)測試盒


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